هدف: طراحی یک روش تشخیص مولکولی سریع جهت تشخیص باکتری Yersinia pestis با صرف حداقل زمان و هزینه.مواد و روشها: واکنش زنجیرهای پلیمراز (Polymerase Chain Reaction; PCR) بر روی ژنهای ویرولانس irp2, caf1, pla به صورت مالتیپلکس و یونیپلکس طراحی و انجام شد. پس از تعیین ویژگی به منظور تعیین حساسیت، ابتدا محصول PCR ژنهای pla و cfa1 در TA کلونینگ وکتور کلون شده و سپس کمترین غلظتی از پلاسمید حامل ژن که بتواند باند واضحی را روی ژل آگاروز ایجاد کند به عنوان حد تشخیص تعیین شد.یافته ها: نتایج PCR مربوط به سه ژن مذکور در هر دو شکل، به ترتیب قطعاتی با طول300bp ،400bp  و 520bp را ایجاد کرد. کمترین تعداد کپی قابل تشخیص مربوط به ژن pla،21  کپی و برای ژن 370caf1 کپی در یک واکنش 25 میکرولیتری به دست آمد. همچنین مثبت شدن واکنش هضم آنزیمی وجود محصولات PCR اختصاصی را تایید کرد.نتیجه گیری: با توجه به وجود کانون های طاعون خیز در ایران، این مطالعه میتواند در فراهم نمودن ابزار تشخیص مولکولی سریع و مطمئن برای ارزیابی جوندگان به منظور پایش مناطق تحت خطر بسیار موثر باشد. از طرفی روشهای طراحی شده در این مطالعه ابزاری دقیق، سریع و کم هزینه برای جستوجو و تشخیص این باکتری در موارد بیوتروریستی فراهم مینماید.

متن کامل مقاله های این شماره به زبان انگلیسی می باشد، لطفا برای مشاهده متن کامل مقالات به بخش انگلیسی مراجعه فرمایید.لطفا برای مشاهده متن کامل این مقاله اینجا را کلیک کنید.

زمینه مطالعه: : نئوسپورا کانینوم تک یاخته انگلی بیماریزاست که به عنوان یکی از عوامل مهم ایجاد کننده سقط جنین عفونی گاو در سراسر جهان مطرح می باشد. هدف: هدف از این مطالعه بررسی و ردیابی حضور انگل نئوسپورا کانینوم در مغز، مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده در گاوداری های شهرستان اراک به روش ملکولی می باشد. روش کار: تعداد 38 نمونه مغز، مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده با روش ملکولی از نظر وجود انگل نئوسپورا مورد آزمایش قرار گرفت. نتایج: بررسی آماری یافته های مطالعه نشان دهنده این است که در 3/26 ٪ از مغز جنین های سقط شده DNA نئوسپورا کانینوموجود دارد و در مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده حضورDNA نئوسپورا کانینوم مشاهده نگردید. ارتباط آماری معنی داری بین آلودگی به انگل نئوسپورا کانینوم باسن مادر (تعداد زایش)، سابقه سقط و حضور سگ در گله وجود دارد. نتیجه گیری نهایی: نتایج تحقیق حاضر ارتباط معنی داری را بین آلودگی به نئوسپوروزیس و تعداد سقط های انجام شده در گاو های مورد بررسی نشان داد؛ به همین دلیل به نظر می رسد این تک یاخته را می توان از عوامل مهم همه گیری های سقط جنین در گله گاوهای مزرعه شیری شهرستان اراک به شمار آورد که لزوم نظارت مستمر در تشخیص و پیشگیری در صنعت گاوداری را گوشزد می نماید.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.

زمینه مطالعه: عفونت های غذایی ناشی از کمپیلوباکتر یکی از عوامل گسترده التهابات معدی- روده ای در انسان می باشد که از نظر مسایل بهداشتی و زیان های اقتصادی در جامعه حائز اهمیت می باشد. هدف: بررسی شیوع آلودگی کمپیلوباکتر در نمونه های پوست مرغ های ارومیه، با استفاده از روش های کشت باکتریایی و واکنش های زنجیره ای پلیمراز می باشد. روش کار: 80 نمونه پوست مرغ از کشتارگاه پروتئین گستر سینا واقع در ارومیه به تعداد مساوی در طول فصل های زمستان و بهار جمع آوری شدند. قدرت زنده مانی کمپیلوباکتر بعد از 24 ساعت نگهداری نمونه ها در شرایط یخچالی بررسی شد. نمونه های مثبت جهت استخراج DNA و انجام PCR مورد استفاده قرار گرفتند. به منظور بررسی فیلوژنتیکی جدایه ها، نمونه های مثبت PCR، توالی یابی شدند. نتایج: %58.75 از نمونه های پوست مرغ با استفاده از روش های کشت های باکتریایی، کمپیلوباکتر مثبت تشخیص داده شدند. نتایج مطالعه قدرت زنده مانی کمپیلوباکتر در شرایط سرد بعد از 24 ساعت، نشان داد که کاهش قدرت زنده مانی کمپیلوباکتر معنی دار نبوده و همچنین میزان آلودگی نمونه ها در فصل بهار بطور معنی داری بالاتر از فصل زمستان بود که ممکن است به دلیل بالا بودن درجه حرارت محیط و ایجاد شرایط مناسب برای کمپیلوباکتر باشد. نتیجه گیری نهایی: پوست مرغ از مخازن مهم کمپیلوباکتر بوده و این موضوع از لحاظ کنترل رعایت بهداشت عمومی در کلیه مراحل تولید تا عرضه محصولات طیور و همچنین انتقال آن به سایر قسمت های لاشه مرغ باید مورد توجه قرار گیرد.

تحقیقات بر روی DNA در تشخیص، کنترل و درمان بسیاری از بیماری ها ازجمله سرطان اهمیت ویژه ای دارد. امروزه استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز دیجیتال قطره ای (ddPCR) برای آزمایشات مختلف بر روی DNA توجه محققان زیادی را جلب کرده است. برای انجام ddPCR به تعداد زیادی قطره با ابعاد میکرونی نیاز است. در مطالعه حاضر، یک سیستم ddPCR با استفاده از تراشه میکروفلوئیدیکی طراحی، ساخته و ارزیابی شد. این سیستم شامل یک تراشه میکروفلوئیدیکی برای تولید قطره و یک دستگاه تامین کننده چرخه های حرارتی مورد نیاز در PCR است. تولید قطره در ریزتراشه به صورت سه بعدی شبیه سازی شد. نتایج شبیه سازی اعتبارسنجی شد. خطای متوسط در شعاع قطرات تولیدشده حدود 5% است. دستگاه چرخه حرارتی ساخته شده، دمای تراشه را با دقت 1/5± درجه سانتی گراد کنترل می کند. فرآیند PCR درون تراشه با اعمال 25 چرخه حرارتی با موفقیت انجام شد. در اکثر قطرات خاصیت فلورسنت مشاهده شد که اثبات می کند دستگاه چرخه حرارتی شرایط تکثیر DNA را در آزمایشگاه به خوبی فراهم کرده است. تصاویر پردازش و سطوح مختلف نور فلورسنت در قطرات شناسایی شد. ضریب تغییرات قطرات انتخاب شده در برنامه پردازش، برابر با 2/5% است که در مقایسه با حالت قابل قبول برای این نوع سیستم ها (کمتر از 8%) دقت مطلوبی را ارایه می دهد. نتایج به دست آمده از این دستگاه کاملاً بومی، می تواند در زمینه های متعددی ازجمله تشخیص سرطان، بررسی بافت سرطانی و ارزیابی موفقیت عمل بافت برداری استفاده شود.

سابقه و هدف: تب مالت یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات مختلف است که توسط گونه های بروسلا ایجاد میشود. اگرچه این بیماری به ندرت کشنده میباشد، اما در صورت عدم تشخیص سریع و مناسب، در همه گیری ها و استفاده عمدی در جنگهای بیولوژیک، صدمات شدیدی به تسهیلات مراقبت پزشکی وارد میکند. با توجه به محدودیتهایی مثل زمان طولانی، دقت پایین، حساسیت کم و نتایج مثبت و منفی کاذب در روشهای تشخیص سنتی بروسلاها، هدف از این مطالعه طراحی روش مولکولی PCR برای تشخیص سریع این ارگانیسم ها میباشد.مواد و روش ها: ژن bcsp که اختصاصی جنس بروسلا میباشد انتخاب و پرایمرهای اختصاصی آن به کمک نرم افزار 3.0v Primer express طراحی شد. برای تعیین ویژگی روش، ژنوم انواعی از باکتریهای کنترل منفی استفاده گردید. به منظور تعیین حساسیت و محاسبه حد تشخیص از کلونینگ محصولات PCR در پلاسمید pTZ57R/T استفاده شد.یافته ها: الکتروفورز محصول PCR ژن bcsp برای باکتریهای استاندارد B.abortus و B.melitensis باندی به اندازه 150 جفت باز نشان داد. آزمایشات PCR با استفاده از ژنوم باکتریهای کنترل منفی، هیچ باندی در ژل آگاروز ایجاد نکرد. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T  به کمک واکنش زنجیرهای پلیمراز و توالییابی تایید شد.بحث و نتیجه گیری: پرایمر طراحی شده برای ژن اختصاصی جنس بروسلا در این روش میتواند با حساسیت تشخیص 1500 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم به کار رود و به این ترتیب هزینه و زمان مورد نیاز برای تشخیص را کاهش دهد.

بروسلوز یا تب مالت (تب مدیترانه ای) به واسطه رشد و تکثیر باکتری کوکوباسیل گرم منفی بروسلا در سلول های پستانداران رخ می دهد و این بیماری به عنوان یک بیماری مشترک بین انسان و دام حائز اهمیت می باشد. تست های سرولوژی متعددی جهت شناسایی این باکتری مورد بررسی قرار گرفته اند، با این‏حال این روش ها محدودیت هایی در شناسایی دقیق باکتری دارند. پژوهش حاضر، با هدف بررسی و شناسایی مولکولی باکتری بروسلا در نمونه های جمع آوری شده از گوسفندان آلوده در منطقه سیستان با استفاده از تکنیک PCR چندگانه انجام شد. در ابتدا نمونه های خون و شیر از گوسفندان جمع آوری گردید. تایید آلودگی به باکتری در ابتدا با استفاده از نمونه های خون و روش سرولوژی رزبنگال صورت گرفت. در ادامه DNA از شیرهای جمع آوری شده استخراج شد و بررسی مولکولی با استفاده از PCR چندگانه و تکثیر دو ژن Omp31  و BLS به منظور تکثیر قطعات با سایزهای bp 347 و bp 256 انجام پذیرفت. از 40 نمونه کلینیکی مورد مطالعه همگی تست رزبنگال مثبت را نشان دادند اما بررسی مولکولی با استفاده از PCR چندگانه 5 نمونه مثبت کاذب تایید شده با تست رزبنگال را نشان داد. استفاده از روش های شناسایی مولکولی به جهت حساسیت و دقت بالاتر و صرف زمان کمتر می تواند به عنوان گزینه مناسب برای شناسایی پاتوژن های بیماری زا مورد استفاده قرار گیرد.

متن کامل این مقاله به زبان انگلیسی می باشد. لطفا برای مشاهده متن کامل مقاله به بخش انگلیسی مراجعه فرمایید.لطفا برای مشاهده متن کامل این مقاله اینجا را کلیک کنید.

زمینه و هدف: یکی از رایج ترین دلایل ناباروری در مردان، واریکوسل می باشد که عبارت است از اتساع و پیچ خوردگی غیرطبیعی سیاهرگ های شبکه پامپینیفرم که در نهایت باعث کوچک شدن بیضه می گردد. مطالعات نشان داده است که افزایش سطح مارکرهای استرس اکسیداتیو، از جمله نیتریک اکسید (NO) در وریدهای گشاد شدهی بیماران مبتلا به واریکوسل، سبب اختلال در عملکرد بیضه می شود. هدف از این مطالعه، بررسی پلیمورفیسمهای T-786C و 4a4b ژن NOS3 به عنوان یک فاکتور ژنتیکی رایج و بررسی ارتباط آن با خطر ابتلا به واریکوسل در بیماران ایرانی بود. روش بررسی: با استفاده از تکنیک های Multiplex-ARMS PCR و PCR به ترتیب ارتباط بین پلی مورفیسم های T-786C و 4a4b ژن NOS3 در 60 مرد ایرانی مبتلا به واریکوسل و 61 نمونه کنترل بررسی شد. آنالیز آماری داده ها با استفاده از آزمون t-test انجام شد. سطح معنی داری، 05/0>P در نظر گرفته شد. یافته ها: نتایج مطالعه حاضر نشان داد از این 60 فرد مبتلا به واریکوسل، 95 درصد دارای ژنوتیپ-786TT، 3/3 درصد دارای ژنوتیپ هتروزیگوت-786TC و 6/1درصد افراد CC برای پلی مورفیسم T-786C بودند. علاوه براین، فقط 5 درصد برای پلی مورفیسم 4a4b هتروزیگوت (ab) و 95 درصد دارای ژنوتیپ نرمال aa بودند که از نظر آماری هیچ ارتباط معناداری مشاهده نشد. نتیجه گیری: در این مطالعه، بیشتر افراد دارای دو ژنوتیپ TT و aa به ترتیب برای پلی مورفیسم های T-786C و 4a4b بودند. براساس این داده ها، ارتباط معنا داری بین پلی مورفیسم های ژن NOS3 و افراد مبتلا به واریکوسل مشاهده نشد. شایان ذکر است که مطالعاتی با نمونه های بیشتر برای تایید این یافته ها باید انجام شود.